Для екстракції ДНК із вологого зразка 1–2 мм частини тіла комахи поміщають у пробірку для ПЛР, потім додають 35 мкл води для ПЛР, 4 мкл 10× буфера BLACK і 1 мкл prepGEM™, потім інкубують при 75˚C протягом 15 хвилин, якщо потрібна дволанцюгова ДНК, у разі одноланцюгової ДНК додатково інкубуйте при 95˚C протягом 5–15 хвилин, а потім…
Аналіз зібраної ДНК Перед спробою аналізу ДНК необхідна ретельна ідентифікація виду за допомогою традиційних методів. Цю ДНК можна отримати практично з будь-якої частини комахи, включаючи тіло, ногу, щетинки, вусики тощо.
The Висолювання ДНК метод вилучення це простий і нетоксичний метод, який виділяє високоякісну ДНК з цільної крові. При стандартному методі висолювання до них після лізису клітин додають білки К і РНКазу. Щоб білки випали в осад із розчину, потрібен був насичений NaCl.
Задіяна необроблена підготовка екстракції ДНК додавання 500 мкл води, вільної від нуклеаз, до зразків, перемішування на вортексі та кип’ятіння при 101º C протягом 10 хвилин. Зразки знову перемішували і центрифугували при 12000 g протягом 2 хвилин.
- Одна самка комара в стерильній мікроцентрифужній пробірці об’ємом 1,5 мл.
- Додайте 150 мкл DNAzol Direct, подрібніть стерильним мікротовкачем протягом 1 хв, потім енергійно перемішуйте протягом 30 с.
- Інкубуйте при 80 °C протягом 20 хв.
- Центрифугувати при 12 000 g протягом 5 хв, перенести супернатант у нову стерильну пробірку.
- Зберігати супернатант при -20 °C.
Для екстракції ДНК із вологого зразка 1–2 мм частини тіла комахи поміщають у пробірку для ПЛР, потім додають 35 мкл води для ПЛР, 4 мкл 10× буфера BLACK і 1 мкл prepGEM™, потім інкубують при 75˚C протягом 15 хвилин, якщо потрібна дволанцюгова ДНК, у разі одноланцюгової ДНК додатково інкубуйте при 95˚C протягом 5–15 хвилин, а потім…